转基因技术在农作物高产、抗病虫与耐除草剂等性状改良方面发挥着重要作用,已广泛应用于农业生产。然而,随着转基因作物种植面积的不断扩大以及基因编辑等新技术的涌现,农作物种子的转基因监管面临日益严峻的挑战。系统综述了主要农作物种子转基因检测技术的应用现状,深入剖析了各项技术的原理与机制,并构建了适用于不同作物的转基因筛查路线图。针对当前检测技术中存在的灵敏度低、多组分同步检测能力不足以及现场快速检测装备研发滞后等关键技术瓶颈,进行了全面分析。在此基础上,对未来发展方向作出展望,以期为农作物转基因生物安全监管提供理论依据。
木聚糖作为植物半纤维素的主要成分,是一种复杂的多聚五碳糖,具有含量丰富、廉价和可再生等特点,但其存在难降解、被利用率低、易造成资源浪费和环境污染等问题。木聚糖酶是降解木聚糖的主要酶类,具有极大的发展潜力,广泛应用于工业、农业、医药、食品等领域。微生物是木聚糖酶的主要来源,不同来源的木聚糖酶也存在着较大差异,但是普遍存在酶活力低下的问题,因此筛选高产木聚糖酶菌株对资源的再利用具有重要意义。简述了木聚糖酶的分类与结构、木聚糖酶菌株的诱变选育方法及木聚糖酶基因的克隆和异源表达,揭示了木聚糖酶的水解机理及其在细菌和真菌表达系统中的表达,以期为木聚糖酶的生产研究提供参考。
硫氧还蛋白系统是机体内重要的抗氧化和还原系统,主要由硫氧还蛋白、硫氧还蛋白还原酶以及辅因子烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸构成。该系统在维持细胞内氧化还原平衡、调控信号转导、调节细胞增殖和凋亡等方面发挥关键作用。近年来,大量研究揭示了硫氧还蛋白系统在多种疾病发生发展中的作用,为相关疾病的治疗提供了新的靶点和策略。综述了硫氧还蛋白系统的分子结构、作用机制、在生理及病理状态下的功能,以及其作为药物靶点的潜在应用,并对未来研究方向进行了展望,为深入理解其在生理病理过程中的作用机制,以及相关疾病的靶向治疗提供理论依据和新的思路。
抗体药物开发面临周期长(>3年)、成本高(>2亿美元)以及多属性协同优化困难等产业瓶颈。传统方法如杂交瘤技术存在通量低、全局优化能力不足等局限。近年来,深度学习(deep learning,DL)技术为抗体药物的智能化开发提供了突破性解决方案。系统综述了DL在抗体药物开发中的研究进展,重点探讨了抗体序列设计、结构预测、亲和力预测与成熟、多目标优化等核心环节的代表性方法与技术挑战,并对未来发展进行了展望,以期为抗体药物研发向智能化、全局化方向转型提供参考。
丙烯酰胺(acrylamide,AA)是一种白色光敏性晶体,1994年被国际癌症研究机构归为2A级人类可能致癌物。AA已被证实具有明确的致突变性和致癌性。微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一类长度为20~25 nt的单链非编码RNA,广泛参与人类基因表达调控,与AA诱导的毒性机制及其生物标志物的筛选鉴定密切相关。综述旨在明确AA的体内过程,探讨miRNAs在AA诱导的细胞毒性中的作用机制,为研究AA毒性诱发的相关疾病的干预策略提供参考依据。
外泌体(exosomes)是直径30~150 nm的天然细胞外囊泡,作为细胞间通讯的关键载体,其携带的蛋白质、核酸、脂质等生物活性分子,使其成为生物医学的研究热点。随着生物技术的发展,外泌体在疾病诊断、药物递送和组织再生等领域展现出巨大潜力。系统阐述了外泌体的基础生物学特性、工程化改造技术(包括基因工程、微流控和化学修饰)的最新突破,及其在肿瘤治疗、组织修复和神经退行性疾病中的创新应用。同时,深入分析了临床转化面临的关键挑战:规模化生产、靶向性优化与标准化。最后,展望了人工智能辅助设计、个性化医疗等未来研发方向。凭借独特的生物相容性与可编程性,工程化外泌体有望作为“下一代药物递送平台”,为精准医疗提供全新范式,具有广阔的临床应用前景。
病原体是一种可引起传染病的微生物,对人类健康构成严重威胁,也带来经济和社会负担。开发高度敏感、特异、便携的实时病原体检测方法对于预防传染病的传播至关重要。即时检测(point-of-care testing,POCT)是一种在采样点使用便携设备和试剂进行快速检测、即时获取结果的体外诊断方法。便携式生物传感器作为POCT重要的实现形式,具备检测快速、成本低廉、易于大规模快速应用等优势,在病原体检测中备受关注。系统综述了便携式生物传感器在细菌、病毒即时检测中的最新应用进展,基于信号传感机制重点讨论了电化学、比色、荧光、表面增强拉曼及表面等离子体共振等检测方法。同时,对融合侧向流动分析(lateral flow assay,LFA)与微流控技术构建的便携式传感器平台进行了总结,并展望了其未来发展方向,旨在为该领域的进一步研究和技术开发提供参考。
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是最常见的神经退行性疾病,微小核糖核酸(microRNA, miRNA)作为调控基因表达的重要分子,在神经退行性疾病中发挥着关键作用。综述了miRNA与AD病理的关联机制及早期诊断相关的研究进展,重点探讨了miRNA在AD核心病理环节中的关键调控作用,如通过靶向β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1,BACE1)等基因调控β-淀粉样蛋白(Aβ)的生成、调控微管亲和调节激酶1(microtubule affinity regulating kinase 1,MARK1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 5,CDK5)等激酶影响Tau蛋白的磷酸化进程,以及广泛参与神经炎症(如miR-155、miR-146a)与氧化应激(如miR-34a)的调节等。同时,总结了miRNA作为AD生物标志物的巨大潜力,并讨论了当前研究面临的挑战与未来方向,以期为阿尔茨海默病的研究与临床治疗提供参考。
邻苯二甲酸酯(phthalate esters,PAEs)是一类广泛存在的环境内分泌干扰物,可通过多种途径导致人群普遍暴露,对女性生殖健康构成显著威胁。目前流行病学研究结果尚不一致,PAEs对卵巢、子宫及妊娠结局的毒性机制仍未完全阐明,限制了风险精准评估与防控策略的制定。系统总结了PAEs的人体暴露特征,重点探讨了其通过干扰多种激素平衡与信号通路介导的多重生殖毒性,包括抑制卵泡发生、降低抗苗勒管激素水平及扰乱类固醇生成;增加多囊卵巢综合征风险;促进子宫平滑肌瘤增殖与内膜异位症侵袭;并显著增加胚胎着床障碍、胎盘发育异常、妊娠丢失和早产等不良结局风险。整合多学科证据,系统解析了PAEs的作用机制,为全面评估其对女性的生殖风险及制定针对性干预措施提供了科学依据。
氮肥施用量是影响烟叶产量与品质的重要因素,但在实际生产中普遍存在施氮量偏高的现象,造成烟叶产量与品质之间的矛盾。为明确适宜施氮范围并提升烟叶生产效益,以‘云烟87’为试验材料,设置低氮(纯氮135 kg·hm-2)、中氮(150 kg·hm-2)和高氮(165 kg·hm-2)3个施氮梯度,通过田间试验系统评价其对农艺性状、产量、产值及外观、感官、物理特性及致香成分的影响。试验结果表明,高氮处理组可显著促进植株的生长发育,株高较中氮和低氮分别提高了6.0%和11.7%,叶宽提升了9.3%~13.3%;烤后烟叶产量分别提升了7.4%和18.4%,外观质量评分亦有所提升。然而,高氮处理会显著降低致香成分积累,中部叶总致香成分含量为低氮组的86.6%,多项感官评价指标得分也低于低氮组。而低氮处理导致烟叶产量下降10%以上,但萜烯类等致香成分显著积累,感官质量表现也更优。由此表明,优化氮肥施用是实现烟叶产量与品质协调统一的关键途径,过量施氮虽能提升产量与外观品质,但会降低烟叶中致香成分的积累从而削弱其内在品质,应根据生产实际优化当前的施氮策略,以保障烟叶优质高效生产和行业可持续发展。
探究了干旱胁迫对药用植物乌拉尔甘草(Glycyrrhiza uralensis)幼苗生理特性的影响及抗旱适应机制。以一年生乌拉尔甘草苗为材料,采用盆栽控水模拟干旱胁迫,设置正常供水对照组(CK)、轻度干旱胁迫组(light stress,LS)、中度干旱胁迫组(moderate stress,MS)和重度干旱胁迫组(severe stress,SS),测定抗氧化系统及渗透调节物质等关键生理参数。结果发现,随着干旱胁迫程度的加剧,甘草叶和根中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和H2O2含量整体呈增加趋势,而在MS组和SS组甘草根中
芥菜作为我国特色蔬菜之一,是研究盐胁迫这种关键非生物胁迫因子对植物幼苗时期成长影响的优质实验材料。评估了132份芥菜种质资源在正常条件与从构建的适用于芥菜萌发成苗期的耐盐性鉴定体系所得的最适盐胁迫(1.0% NaCl)下的萌发表现及幼苗根系形态。根据生长状况以及各根系性状的耐盐指数并采用隶属函数法进行综合分析,得到耐盐性综合评价决策值(decision value, D值)。最终从132份芥菜分类出38份盐敏感型,鉴定出3份强耐盐种质(D>0.6)、22份耐盐种质(0.3<D<0.6)和69份不耐盐种质(D<0.3)。其中,对根部耐盐系数进行主成分分析,所得的综合指标1(composite index 1,CI1)与CI2贡献率分别为66.886%和26.835%,证明在CI2占比较高ST-AD独立性更强,其他根部系数与D值存在线性关系并可构建回归方程。综上,芥菜的根系系数可用于更便捷地综合评估其耐盐性,为评价芥菜的耐盐性提供了新方法。
为综合评价会宁地区蒲公英的质量特征,建立了高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)指纹图谱并进行相似度评价分析。采用化学模式识别方法对15批蒲公英进行主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA),并结合多成分含量测定,对会宁地区蒲公英的品质进行综合评价。结果表明,蒲公英指纹图谱有20个共有峰,除S3和S12外,其余13批相似度均大于0.89;PCA将15批蒲公英按来源划分为2类,OPLS-DA进一步筛选出5个差异性标志物,分别是咖啡酸、新绿原酸、阿魏酸、菊苣酸和绿原酸,且差异显著性排序为咖啡酸>新绿原酸>阿魏酸>菊苣酸>绿原酸;含量测定结果显示,蒲公英菊苣酸含量均达到药典规定标准,且栽培种植蒲公英中的咖啡酸和菊苣酸普遍高于野生蒲公英。研究建立的蒲公英质量综合评价方法能有效分析不同批次蒲公英质量的差异性,为蒲公英的质量评价、栽培种植以及健康产品开发提供科学依据。
研究聚焦西方蜜蜂(Apis mellifera)的细胞色素c基因(cytochrome c,CytC),解析其分子特征、系统进化及时空表达模式。通过PCR扩增CytC的编码序列(coding sequence,CDS)并进行Sanger测序比对;利用ProtParam、Porter5、SWISS-MODEL、STRING数据库等预测CytC蛋白的理化性质、结构域及磷酸化修饰位点并构建蛋白互作网络;采用MEGA软件对10个物种的CytC蛋白进行多序列比对与系统进化分析;通过RT-qPCR检测CytC在工蜂成虫7个组织、幼虫发育阶段和成蜂不同日龄的表达谱。结果表明,CytC的CDS全长327 bp,共编码108个氨基酸,分子量约为11 kD,等电点为9.50。CytC蛋白无信号肽与跨膜结构,含13个磷酸化位点;二级结构以无规则卷曲(48.15%)和α-螺旋(25.93%)为主。系统进化显示,西方蜜蜂与小蜜蜂和中华蜜蜂的CytC蛋白聚为一支,与熊蜂科物种的分化显著。时空表达谱表明,CytC基因在脑组织中表达最高,咽下腺中最低;CytC在卵期的表达量最高,且显著高于其他时期(P<0.05),在工蜂幼虫体内的表达水平总体表现为持续下降趋势;成蜂中,CytC表达量随成虫期日龄增加逐渐上升,在18日龄最高,在1日龄最低。综上,CytC是亲水性的胞内蛋白,具有保守的分子特征与功能,其可能在西方蜜蜂发育过程中发挥着重要作用。
研究通过原生质体转化技术将谢瓦曲霉(Aspergillus chevalieri)来源的葡萄糖氧化酶基因(glucose oxidase,AcGox)导入黑曲霉(A. niger)菌株,获得表达的重组AcGox蛋白。结果显示,重组AcGox蛋白的最适pH为6.0,最适温度为32 ℃,表现出优良的耐酸性和较好的热稳定性。然而,AcGox的比活性仅为70.81 U·mg-1,成为限制其应用的关键瓶颈。为解决这一问题,研究在AcGox-5表达菌株基础上,进一步过表达编码核黄素激酶和黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD)合成酶基因,RT-qPCR证实2个基因的转录水平显著上调。最终,优化后的菌株AcGox/FAD/FMN-3生产的Gox比活性提升至111.55 U·mg-1,增幅达57.5%。研究证实辅因子FAD的供给水平是限制重组AcGox催化效率的关键因素,为酶工程中“辅因子工程”策略提供了直接实验证据,并为葡萄糖氧化酶的工业化生产提供了可推广的宿主改造方案,推动了Gox的应用。
贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SD23LJ1314是一株对辣椒疫病(Phytophthora capsici)具有很好防效的生防菌,其发酵水平的高低直接影响田间防治效果。为提升该菌株的发酵水平,以菌体量为核心评价指标,采用平板计数法对8种常用工业培养基的发酵菌量进行比较,筛选出了SD23LJ1314发酵的最适基础培养基。在此基础上,通过单因素实验对11种工业发酵常用碳源和9种氮源进行优化,确定最优碳氮源;进一步采用Plackett-Burman实验设计,并结合Box-Behnken设计与响应面分析法,对最优碳氮源的添加浓度进行了精确优化。结果表明,果糖与酵母粉分别为最优碳源和氮源组合,最终确定的发酵培养基配方为果糖10.75 g·L-1、酵母粉21.48 g·L-1、NaCl 5.65 g·L-1、MnSO4·7H2O 0.71 g·L-1。在此优化条件下,该菌株的发酵菌量达到9.32×109 CFU·mL-1,与基础培养基相比,菌体产量显著提高了31.6%。通过系列实验,明确了贝莱斯芽孢杆菌SD23LJ1314的高效发酵工艺,所获得的优化培养基配方及相关技术参数,为该生防菌的规模化生产奠定了坚实基础,对推动其应用于辣椒疫病的生物防治制剂开发具有重要价值。
功能性食醋是食醋产业多元化与高值化发展的重要方向。为评估不同再加工工艺的改良效果,以“华佗药香醋”为对象,采用液相色谱-串联质谱联用(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术及体外抗氧化活性测定等方法,系统比较了浸泡(25 ℃)与煮沸处理对其营养成分与功能活性的影响。结果显示,浸泡工艺提升了产品的营养成分含量,总有机酸和总氨基酸分别提高了10.43%和30.04%,但未达到显著水平。同时,该工艺还显著增强了样品的抗氧化能力,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazine,DPPH)和2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸[2, 2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS]自由基清除率分别提升了87.39%和58.36%(P<0.05)。扫描电镜分析(scanning electron microscopy, SEM)进一步揭示药香醋中存在天然纳米结构,且其形貌、粒径及Zeta电位均受加工工艺调控。结果表明,浸泡工艺可同步提升药香醋的营养成分与抗氧化能力,工艺可调纳米结构为其功能增效机制提供了直接微观证据。
香菇具有重要的食药用价值,市场上掺假的情况屡有发生,传统的形态学鉴定方法难以对香菇深加工产品进行鉴定,建立香菇源性成分分子生物学检测方法具有重要意义。根据香菇线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1(nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase subunit 1, ND1)基因序列设计特异性引物和探针,建立食品中香菇源性成分实时荧光PCR检测方法。结果表明,方法仅对花菇、厚菇、薄菇、野生香菇有扩增,对其他常见的28种食用菌均无交叉反应,方法的检出限分别为100 copies·μL-1和0.05%(质量分数),且具有很好的重复性,实际应用检测准确。该方法特异性好、灵敏度高,稳定且实用,可以满足食品中香菇源性成分的检测需求。
研究旨在对纯露类化妆品中洋葱伯克霍尔德菌群的检测方法进行评价。选取了已知被洋葱伯克霍尔德菌群污染的20批次纯露类化妆品,运用平皿法进行洋葱伯克霍尔德菌群检测与判定,并借助基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和系统发育分析方法对从样品中分离出的洋葱伯克霍尔德菌群进行鉴定和遗传学特征分析。结果显示,平皿法的检测结果能很好地与MALDI-TOF MS、基因测序系统发育分析结果对应,表明平皿检测方法简单、专属性好,可用于纯露类化妆品中不可接受微生物洋葱伯克霍尔德菌群的检查及标准方法的建立。
研究旨在建立医学研究委员会5号细胞系(medical research council 5,MRC-5)工作细胞库,并对MRC-5工作细胞库应用于狂犬病灭活疫苗的生产进行相关研究。按照《中华人民共和国药典》建立MRC-5工作细胞库,根据药典规定进行检验,并对MRC-5细胞生长曲线、传代稳定性及狂犬病病毒适应性进行研究。结果表明,建立的MRC-5细胞工作库细胞呈长梭形,边缘清晰,轮廓清楚,细胞成活率为99.03%,无菌检查、支原体检查及细胞外源因子检查均符合规定。MRC-5细胞生长曲线呈S形,细胞在2~3 d进入对数生长期,细胞倍增时间为21 h,连续传代至66代细胞形态正常。36、38、40和42代的MRC-5细胞接种PM株狂犬病病毒,测得病毒滴度均值分别为6.57±0.21、6.40±0.26、6.23±0.21和6.40±0.17 lgCCID50·mL-1,变异系数(coefficient of variation,CV)在2.70%~4.13%。综上,研究建立的MRC-5工作细胞库符合《中华人民共和国药典》规定,传代稳定性良好,对狂犬病病毒较为敏感,可以用于狂犬病疫苗的生产。
常规抗体筛选主要基于生理pH条件进行亲和力评估和筛选,可能忽略了肿瘤微环境酸性特征对抗体结合作用的影响。研究旨在建立多pH梯度筛选策略,通过模拟肿瘤微环境条件,筛选出酸性pH条件下保持高亲和力与稳定性的5T4抗体克隆,提升抗体开发的临床转化成功率。选取前期筛选得到的5T4杂交瘤克隆,上清抗体经浓度定量后,利用Biacore T200系统构建多pH梯度(7.4、7.0、6.6、6.0、5.5)实验体系,采用表面等离子共振技术实时监测抗体亲和力动态变化。结果发现,常规生理条件下筛选的高亲和力抗体5T4-15,在酸性环境中亲和力随pH降低呈逐步下降趋势,至pH 5.5时丧失与抗原的结合能力。相比之下,经pH 5.5压力筛选获得的抗体5T4-45,在pH 7.4~6.0的肿瘤微环境相关区间内均能保持稳定的高亲和力,展现出卓越的酸性环境适应性。在抗体初筛阶段引入酸性压力测试(pH 5.5),可有效鉴别并筛选出肿瘤微环境适应性抗体,突破常规生理pH筛选高亲和力抗体的局限性,并提升优质候选分子的筛选效率,为开发临床转化潜力更高的实体瘤治疗性抗体提供新策略。
作为一种铁死亡基因,核受体辅激活因子4(nuclear receptor coactivator 4,NCOA4)可通过消除游离铁和谷胱甘肽起到保护细胞的作用。为了了解NCOA4预测结肠癌的疗效,通过分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据中NCOA4在结肠癌中的表达,探究了其与预后、免疫微环境及治疗的关系。研究结果显示,NCOA4在结肠癌组织中的表达低于正常组织(P<0.05),且其低表达与较短总生存期相关(P<0.05)。高、低NCOA4表达组间的差异基因主要富集于免疫及肿瘤相关通路。另外,NCOA4表达与免疫微环境、免疫细胞浸润及免疫检查点相关。进一步的药物敏感性与免疫治疗分析显示,NCOA4低表达的结肠癌患者对细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(cytotoxic T lymphocyte antigen 4,CTLA4)靶向治疗以及Raf激酶抑制剂等化疗药物可能具有更好的治疗反应。综上,NCOA4低表达与结肠癌不良预后及免疫细胞浸润受损有关,针对免疫检查点靶向治疗并联合化疗药物可有效治疗NCOA4低表达的结肠癌患者。
为了探讨转录因子TWIST1对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)细胞自噬的影响,以及是否通过自噬调控线粒体功能和对化疗药物阿糖胞苷的耐受性,构建包含TWIST1 shRNA及scramble对照慢病毒,感染AML细胞。通过Western blot检测敲降TWIST1的AML细胞中LC3-Ⅱ和p62的表达,分析自噬通量;利用TMRM和MitoTracker染色检测敲降TWIST1对细胞线粒体膜电位和质量的影响,Annexin V/7-AAD检测细胞凋亡水平的改变以及AML细胞对阿糖胞苷敏感性的变化;利用自噬激活剂西罗莫司处理感染shTWIST1的细胞,评价对上述作用的干预效果。结果证实,敲降TWIST1可抑制自噬,表现为LC3-Ⅱ表达降低和p62积累,同时出现线粒体功能受损及细胞凋亡水平显著升高(P<0.05);西罗莫司可部分恢复自噬流量、改善线粒体功能并降低凋亡率。结果表明,敲降TWIST1增强了AML细胞对阿糖胞苷的敏感性,西罗莫司可部分逆转此效应。综上,TWIST1通过调控自噬影响AML细胞线粒体功能和化疗敏感性,研究结果为AML耐药机制及自噬靶向治疗提供理论依据。
三阴性乳腺癌具有代谢重编程特征,糖酵解途径的异常激活是其关键特征之一。乳酸作为糖酵解途径的终产物,可在细胞、器官及组织间发挥信号传导功能,从而促进肿瘤的侵袭与转移。近期研究首次揭示乳酸可作为底物参与新型翻译后修饰乳酸化。因此,围绕乳酸化相关基因在三阴性乳腺癌中的作用展开探讨。利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)下载151例三阴性乳腺癌样本和113例癌旁样本的转录组数据及其相应的临床信息。通过差异分析、通路富集、单因素和多因素Cox分析得到乳酸化预后基因。在TCGA-TNBC训练队列中构建乳酸化相关基因的预后模型,GSE21653、GSE58812和METABRIC-TNBC作为验证队列进行模型验证。根据乳酸化风险评分将样本分为高乳酸化风险组和低乳酸化风险组,生存分析、受试工作者曲线和列线图进一步验证模型性能,并进一步分析该模型与免疫细胞浸润及药物敏感性的关联。结果显示,基于4个乳酸化相关基因建立的预后模型,对三阴性乳腺癌患者具有良好的预后预测能力。生存分析结果表明,高乳酸化风险评分与患者不良预后显著相关,高风险组患者的总体生存率均低于低风险组。同时,高低乳酸化风险组的患者在肿瘤免疫微环境浸润特征及药物反应敏感性方面均表现出显著差异。这一发现提示,乳酸化相关基因有望成为三阴性乳腺癌的新型分子生物标志物及潜在治疗靶点。
研究旨在探讨胞质多聚腺苷酸化结合蛋白1(cytoplasmic polyadenylation element-binding 1,CPEB1)在卵巢癌顺铂(cis-diamminedichloroplatinum Ⅱ, DDP)耐药性中的作用及其相关机制。通过基因表达谱交互式分析平台(gene expression profiling interactive analysis, GEPIA)和基因表达数据库(gene expression omnibus, GEO)分析CPEB1在卵巢癌组织及耐药细胞系中的表达;采用浓度梯度递增法构建卵巢癌顺铂耐药细胞系A2780/DDP和SKVO3/DDP,通过CCK-8法检测细胞活力及最大半数抑制浓度(half-maximal inhibitory concentration,IC??);通过RT-qPCR和Western blot检测CPEB1 mRNA和蛋白表达。在耐药细胞A2780/DDP和SKVO3/DDP中转染CPEB1过表达质粒,通过Transwell和划痕试验检测细胞侵袭和迁移能力;通过Western blot检测上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关标志蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的表达。结果发现,CPEB1在卵巢癌组织及顺铂耐药细胞系中低表达;过表达CPEB1可显著提高耐药细胞A2780/DDP和SKVO3/DDP对顺铂的敏感性,降低其IC??值,并抑制细胞的侵袭和迁移能力。同时,过表达CPEB1可上调上皮标志物E-cadherin的表达,下调间质标志物N-cadherin和Vimentin的表达,逆转EMT进程。结果表明,CPEB1可通过抑制EMT过程增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,逆转其耐药表型,有望成为卵巢癌耐药治疗的潜在靶点。