化石能源的大量使用导致大气中的二氧化碳(CO2)浓度不断升高,所引发的全球温室效应乃至粮食危机威胁着人类社会的繁荣稳定。随着合成生物学技术的发展,利用微生物细胞工厂将CO2转化为高值产品不但有望缓解气候恶化,还能够产生经济效益。首先介绍了自养和异养微生物的碳固定途径和策略以及用于CO2资源化利用的底盘微生物菌株。而后,总结了以CO2为原料的产物合成领域的研究进展。在此基础上,进一步归纳了提升产物产量的代谢工程手段及发酵技术。最后对CO2资源化利用研究领域的未来发展趋势进行了展望。综述期望为推动基于微生物细胞工厂的CO2转化技术的发展助力,也为以CO2为原料的工业产品制造研究提供策略及技术参考。
产甲烷古菌是一类严格厌氧微生物类群,能够利用一碳(C1)或二碳(C2)化合物生长并产甲烷,且具有独特的膜脂结构和较好的极端环境耐受能力,因此在CO2等碳资源高值化利用方面展现出底盘细胞潜力。目前,以甲烷八叠球菌属(Methanosarcina)和甲烷球菌属(Methanococcus)为代表的模式产甲烷古菌已逐步建立了穿梭载体、表达调控系统和同源重组、基因编辑技术等遗传改造工具箱。基于此,通过代谢重构和异源代谢途径整合,产甲烷古菌可用于生物合成类异戊二烯、生物塑料等多种非甲烷高值化合物及有机酸和有机醇等小分子平台化合物。从产甲烷古菌的遗传改造工具和高值化合物合成两个方面,系统综述了该领域的研究进展,分析了产甲烷古菌细胞工厂的潜在应用前景,并对未来研究方向进行了展望,以期为产甲烷古菌的合成生物学研究提供参考。
面对全球化石资源枯竭与环境问题加剧的双重挑战,可再生生物质的高值化应用已成为实现绿色可持续发展的关键路径。微生物细胞工厂凭借其高效的代谢网络整合、辅因子自主再生及模块化组装等优势,已成为介导多酶级联反应的核心载体,为突破单一酶催化效率低、产物单一及过程复杂等瓶颈提供了创新解决方案。系统综述了微生物细胞工厂介导的多酶级联反应的核心构建策略,阐述了大肠杆菌、酿酒酵母、黑曲霉等典型宿主细胞的改造与适配机制。重点介绍了其在体内级联与混合级联体系中的应用特性。同时,总结了该技术在复杂生物质高值转化的最新研究进展,深入分析了当前面临的限速酶识别与改造、酶系反应条件兼容性、宿主代谢流竞争及规模化应用成本等关键挑战,以期为微生物细胞工厂介导的多酶级联反应在生物质高值转化领域的工业化应用提供参考。
甜菜色素是一类天然色素,主要分为红紫色甜菜红素和黄橙色甜菜黄素。因具有优良的着色性能及抗氧化、抗炎、抗肥胖等生物活性,甜菜色素在食品、营养保健品、医药等领域展现出广阔的应用前景。然而,天然提取存在成本高、效率低及产物稳定性差等瓶颈,制约了商业化发展,因而,采用合成生物技术构建微生物细胞工厂异源生产合成甜菜色素已成为研究热点。综述了甜菜色素的化学特性与天然合成途径,重点分析了原核、真核等不同底盘生物的合成策略,系统阐述了关键合成酶功能、代谢路径调控及优化方案,探讨了未来研究方向与应用前景,以期为甜菜色素工业化生产提供新思路。
类胡萝卜素是一类重要的天然萜类色素,在食品、医药、饲料和化妆品等领域具有广泛应用。微生物细胞工厂因具有生长快、遗传操作便捷和易于规模化培养等优势,已成为类胡萝卜素绿色高效生产的重要平台。系统综述了以大肠杆菌为代表的原核微生物以及以酿酒酵母和解脂耶氏酵母为代表的真核微生物在类胡萝卜素生物合成中的代谢工程改造策略,重点总结了前体供应途径优化、关键酶工程、代谢流重定向、辅因子调控、膜工程及多策略协同等方面的研究进展。在此基础上,进一步比较了原核与真核微生物在膜系统组成、疏水性产物储存能力及工程改造重点上的差异,分析了解脂耶氏酵母作为产油酵母在高疏水性类胡萝卜素合成中的独特优势及其定向驯化潜力,并对人工智能(artificial intelligence, AI)辅助代谢元件优化和相关未来研究方向进行了展望,以期为类胡萝卜素绿色高效生物制造和工业化应用提供参考。
靛蓝作为一种历史悠久且应用广泛的蓝色色素,传统生产方法存在植物提取效率低、化学合成污染大等问题,推动其绿色生物制造成为研究热点。目前,酶法主要集中在黄素单加氧酶和细胞色素P450单加氧酶的挖掘与改造,通过定向进化与理性设计提升其催化效率;发酵法则侧重于利用野生菌株或基因工程菌株,结合代谢工程与发酵过程优化以提高产量。系统梳理了两类方法的关键酶、菌种、改造策略及优化手段,并总结了当前工业化应用中存在的产率低、稳定性不足等挑战,旨在为靛蓝的绿色、高效生物制造提供理论参考与技术支撑,推动其在可持续发展领域的应用。
芳香族氨基酸(aromatic amino acid, AAA)及其衍生物具有丰富的生物学功能,广泛应用于食品、医药等众多领域。随着合成生物学的发展,利用酵母进行微生物合成已成为绿色制造的研究热点。然而,酵母合成体系面临着代谢途径通量失衡、调控精度不足、底盘适配性差等问题,制约了大规模的生产应用。综述了酵母细胞工厂合成AAA及其衍生物的代谢路径调控策略。首先梳理了AAA的核心合成路径和主要限速瓶颈;继而从静态调控、时空动态调控、系统理性指导及人工智能等多个维度,归纳了代谢途径调控手段的演进;进一步分析了模式底盘(酿酒酵母)与非常规酵母在合成方面的代谢特性;最后总结了当前挑战并展望了未来方向,以期为构建高产酵母工程菌株提供策略参考。
高产重组蛋白是生物制造领域的核心需求之一,因此开发遗传稳定、高产的细胞工厂至关重要。解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)作为一种非常规酵母,因具有优秀的蛋白分泌能力、完善的真核翻译后加工功能、广阔的底物来源和良好的工业发酵特性,逐渐成为新型高效表达微生物。然而,天然酵母体系仍面临诸多挑战,难以满足多样化的重组蛋白生产需求。综述了解脂耶氏酵母细胞工厂生产重组蛋白的研究进展,分析了解脂耶氏酵母与常见表达宿主的特性,梳理了表达系统的核心元件及其优化策略,总结了宿主的基因编辑工具,阐述了蛋白分泌与稳定性的提升策略及应用实例,并对未来的发展方向进行了展望,以期为研发高效蛋白表达宿主助力。
建筑微生物为建筑行业的低碳化转型提供了新路径。系统综述了建筑微生物细胞工厂的工程化开发体系,重点分析了适配高碱、干燥等极端环境的巴氏生孢八叠球菌与芽孢杆菌等耐久性底盘细胞。通过代谢工程与合成生物学工具,实现了矿化效率与界面结合稳定性的定向强化。提出了以模块化反应器、资源化原料供给及闭环废弃物循环为核心的工厂架构,探讨了利用工业固废实现在地化生产的技术路径。最后,通过分析微生物在裂缝修复、岩土加固及生物基材料制备中的应用,总结了当前的技术瓶颈,并对“按需设计”的建筑生物制造进行了展望,旨在为绿色建筑材料的研发与工程应用提供理论基础与技术参考。
随着国家化肥农药减量增效(简称农业“双减”)政策的深入推进,在日益严峻的气候与环境挑战下,农业领域亟须通过产品创新以适配时代发展要求。在政策与现实的双重要求下,如何最大限度地提高作物产量与质量,并尽量减少农业生产对环境的影响成为实现粮食安全的潜在挑战之一。通过概述生物刺激素的定义,归纳总结了微生物及其代谢产物在改善作物生长及调控作物应对病虫害等生物胁迫与盐胁迫、温度胁迫、干旱胁迫及重金属胁迫等非生物胁迫方面的研究进展,揭示了微生物类生物刺激素在农业中的应用潜力,并对微生物类生物刺激素的未来发展进行了展望,以期为解决气候变化、环境污染等带来的粮食安全问题提供新的思路和方法。
随着高通量测序技术的快速发展,生物信息学进入多组学大数据时代,Python凭借其灵活性和丰富的工具库,已成为该领域不可或缺的分析语言。尽管Python应用广泛,但在处理超大规模数据、算法通用性及模型可解释性等方面仍面临诸多挑战,制约了其在生物信息学中的深入应用。系统综述了Python在基因组学、转录组学、蛋白质组学和代谢组学中的应用进展,重点介绍了其数据预处理、分析流程及可视化功能;详细阐述了基于Python的机器学习(如随机森林、支持向量机)和深度学习(如神经网络、图卷积网络)方法在生物标志物筛选、疾病预测及药物研发中的应用实践;并通过典型案例分析了当前存在的主要问题及改进方向。旨在为生物信息学科研人员提供Python在多组学数据分析中的系统参考,帮助解决大数据处理、模型优化等实际问题,推动生物数据分析技术的持续发展。
传统毒理学评价长期依赖啮齿类等哺乳动物模型,面临成本高、周期长、物种外推不确定性及伦理争议等多重限制。在这一背景下,开发高效、可靠且符合伦理规范的替代检测模型已成为该领域的迫切需求。非哺乳动物模型因其独特的生物学特征、较高的繁殖效率及较低的伦理争议,在预测毒理学研究中展现出广阔的应用潜力。阐述了卤虫、秀丽隐杆线虫、斑马鱼、鸡胚绒毛尿囊膜、果蝇、水螅等非哺乳动物模型在预测毒理学中的应用,并进一步系统总结了近年来兴起的类器官芯片、计算毒理学、人工智能、多组学技术在毒性筛选与评价中的应用现状,重点解析了各类模型在毒理学响应相关性等方面的优势和面临的挑战,包括物种间代谢差异、模型有效性验证不足等问题。旨在为研究人员在替代模型选择与策略优化方面提供理论支持,从而推动预测毒理学模型的创新发展。
人源化斑马鱼模型可精准模拟人类生理和病理过程,有效突破物种间的研究壁垒,现已成为生物医药研究领域的重要载体。基于此,系统阐述了斑马鱼在构建人源化动物模型中的天然优势,对成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)、Tol2转座子和异种移植3种常用人源化斑马鱼模型构建技术的技术原理、特点和优势等进行了较为全面的总结,并重点介绍了人源化斑马鱼模型在心血管、肿瘤、神经系统和肝脏等多个疾病领域的应用现状和突破,提出了其在未来研究中可能的发展方向,如多模型综合应用、多技术融合创新等,以期为人源化斑马鱼模型的研究提供一定的技术参考,进一步推动医药研发领域的研究。
肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)是由肿瘤细胞、免疫细胞、血管及细胞外基质等共同构成的复杂环境,对肿瘤的发生、发展和转移产生关键影响。五味子作为传统中药材,含有木脂素、多糖、挥发油、有机酸、萜类及黄酮类等化学成分,其中木脂素和多糖是主要活性成分,可通过调控肿瘤细胞生长凋亡、调节免疫细胞功能、抑制血管生成、影响细胞外基质等多途径影响TME,发挥抗肿瘤作用。重点综述了五味子活性成分调节TME的作用机制与研究进展,旨在为五味子抗肿瘤药物研发、中医药靶向TME的策略制定及临床实践提供理论依据与方向指引。
大量研究表明,钙依赖蛋白激酶CPKs在植物响应逆境胁迫过程中发挥着重要作用。为深入探究GhCPK4基因的作用机制,对GhCPK4蛋白进行生物信息学分析,并研究其在棉花中的表达模式。结果表明,GhCPK4蛋白含有蛋白激酶结构域和EF手型结构域,序列保守性较高。GhCPK4无信号肽,主要定位于细胞核中,属于不稳定的亲水性蛋白;具有62个磷酸化和6个糖基化修饰位点;其二级结构主要由无规则卷曲和α-螺旋构成,存在形式为单体。GhCPK4基因在棉花所有组织中均有表达,但表达水平存在显著差异,花瓣中的表达高于其他组织。研究结果可为棉花GhCPK4基因在棉花黄萎病中生物学功能的深入研究提供理论依据。
操作简便的磁珠冻存法已成为检测实验室菌株储存的主流方式。为明确磁珠冻存法保藏食源性标准菌株的稳定性,研究选取12株含革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、芽孢菌、兼性厌氧菌、专性厌氧菌、需氧菌等常见食源性标准菌株为对象,采用平板计数法检测反复冻融、不同冻存时长对菌株活性的影响,通过VITEK2 Compact全自动微生物分析系统及16S rDNA序列分析验证菌株生化与遗传稳定性。结果显示,反复冻融10次后,金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌等9株菌活菌数波动小,稳定性强;铜绿假单胞菌活菌数持续下降,产气荚膜梭菌与副溶血性弧菌经6次冻融后完全失活。在-70 ℃未开封保藏15年的情况下,金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌等10株菌株仍维持较高活性,产气荚膜梭菌与副溶血性弧菌几乎完全失活。2种验证方法表明,所有菌株经处理后生化特性与遗传基因型均稳定,无明显变异。综上,磁珠冻存法整体适用于常见食源性致病菌的长期保藏,但产气荚膜梭菌与副溶血性弧菌对反复冻融耐受性差,需优化保藏条件。研究结果可为菌株规范化管理以及菌株期间核查等提供科学数据参考,并填补了国内菌株保藏领域菌株稳定性的研究空白。
2型糖尿病可引发多种严重并发症,影响全球超4亿人的健康。有研究发现,益生菌可刺激肠道L细胞分泌胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1),继而达到显著的降糖效果。筛选具有显著促进GLP-1分泌的益生菌菌株,旨在为2型糖尿病提供新的治疗策略。通过免疫酶联吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)对5株候选菌株促进小鼠小肠内分泌细胞(small intestine endocrine cell line,STC-1)分泌GLP-1的含量进行比较,筛选出GLP-1分泌量最高的菌株;评估该菌株对糖相关代谢酶(α-淀粉酶)的抑制活性;通过生理生化实验对菌株进行安全性评价,为其应用提供数据支持;利用荧光定量PCR检测益生菌干预下小鼠小肠内分泌细胞STC-1的G蛋白偶联受体(Gpr41和Gpr43)的相对表达情况,对其降糖机制进行初步探索。结果发现,发酵粘液乳杆菌TH02105(Limosilactobacillus fermentum TH02105)发酵上清液可促进STC-1细胞分泌GLP-1,分泌量为140.340 ng·mL-1,显著高于其他菌株(P0.001),其对α-淀粉酶的抑制率达66.30%。L. fermentum TH02105对数生长期为2~8 h,最适温度为37 ℃,最适pH为6;该菌在人工模拟肠液、胃液2.5 h后存活率均在50%以上,对人结肠腺癌细胞Caco-2的黏附数量为334.02 CFU·cell-1;同时,抗生素呋喃妥因、米诺环素、多黏菌素B、环丙沙星、氯霉素、诺氟沙星、左氟沙星均可抑制该菌活性。该菌可显著上调Gpr41/43基因的相对表达量(P0.01)。研究筛选出的L. fermentum TH02105可显著促进STC-1细胞分泌GLP-1,发挥降糖作用;同时该菌对胃肠液有较好耐受性,对Caco-2黏附性较好,有利于发挥定植作用,为研发糖尿病防治药物和保健品提供潜在的菌株材料。
血小板是血液中最小的无核血细胞,其中丰富的RNA和蛋白质是发挥凝血、免疫等功能的分子基础。RNA干扰是研究血小板基因功能的有力工具,但相关研究还处于初步探索阶段,目前尚无有效、稳定的血小板RNA干扰技术。为了建立高效、稳定的血小板RNA干扰技术,以小鼠外周血血小板为研究对象,分别从转染试剂、干扰RNA类型等方面进行体系优化。通过监测核酸转染效率、维持时间、血小板存活状态、基因干扰效率等进行系统评价,最终建立了以Mate Plus脂质纳米颗粒代替经典阳离子脂质体转染试剂Lipofectamine 2000、单链反义寡核苷酸代替传统双链小干扰RNA的高效RNA干扰体系,将干扰RNA的转染效率从10%以下提高至70%以上,且维持稳定转染48 h以上。在此基础上,以血小板中表达丰度极高的胸腺素β4(thymosin β4,Tmsb4x)基因为例,成功利用ASO/Mate-Plus体系实现Tmsb4x基因的有效敲降,其RNA水平降低30%以上。但是,Tmsb4x基因的敲降并不影响其蛋白表达,提示其可用于特异性研究血小板中RNA的功能。同时,仅Tmsb4x RNA的敲降可显著影响活化血小板的黏附铺展功能,提示该基因可能存在独立于蛋白外的RNA功能。综上,建立与优化的血小板RNA干扰技术,为研究血小板特定RNA功能以及血小板快速功能响应的分子基础提供了有力的工具。
异质核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoproteins,hnRNPs)家族参与多种肿瘤的发生发展,但其在慢性髓系白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)中的作用尚不明确。已有研究证实,肉瘤融合蛋白(fused in sarcoma, FUS)是维持CML细胞增殖的关键基因,其高表达与患者不良预后相关。研究整合成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR)筛选、RNA干扰及细胞功能实验,系统验证了FUS在CML中的关键作用。敲降FUS可显著抑制K562细胞增殖,导致静止期(G0期)阻滞并促进细胞凋亡。核内FUS结合于启动子区,与转录共激活因子溴结构域蛋白4(bromodomain protein 4,BRD4)及染色质重塑因子1(brahma-related gene 1, BRG1)存在靶基因重叠,可能协同调控染色质结构及转录活性。同时,FUS可与多聚嘧啶束结合蛋白1(polypyrimidine tract binding protein 1,PTBP1)相互作用,二者可能协同调控基因表达与转录后加工,共同促进CML细胞生存。综上,FUS可能通过调控染色质空间构象维持致癌转录程序,并与PTBP1在转录及转录后层面形成功能协同网络,共同促进CML进展。
为解析生理与应激状态下小鼠骨髓和脾脏中红系造血岛(erythroblastic island,EBI)的形态特征及细胞组成变化,并阐明髓外造血(extramedullary hematopoiesis,EMH)的微观结构基础。采用健康成年C57BL/6J小鼠作为实验对象,分别建立生理盐水对照组和苯肼(phenylhydrazine, PHZ)诱导急性溶血性贫血组,通过密度梯度沉降法富集骨髓与脾脏红系造血岛,并用流式细胞术分析细胞组成,成像流式观察形态及数量变化。结果显示,EBI红系造血岛核心组分包括红系前体细胞、巨噬细胞及粒/单核细胞,偶见淋巴细胞附着。生理与溶血状态下骨髓红系造血岛形态及各阶段红系细胞比例无显著差异。生理条件下成年小鼠脾脏仅含少量红系造血岛;急性溶血后脾脏体积增大2倍以上,红系造血岛数量显著增加,典型“花环样”结构密集出现,但岛内各阶段红系细胞构成比例稳定,原红细胞、早幼红细胞、中幼红细胞及网织红细胞分布模式与骨髓一致。这些结果提示脾脏通过红系造血岛数量扩增代偿性增加红细胞生成,岛内红系前体细胞仍遵循固有分化秩序,可为理解髓外造血的细胞学机制提供实验依据。
利用早期筛选的杂交瘤上清进行肿瘤细胞迁移抑制作用的评估。首先通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)筛选抗αvβ3杂交瘤阳性克隆,收集发酵液后采用Biacore检测亲和力,随机挑选9株亲和力梯度不同的混克隆上清;以基因工程改造的H-αvβ3-A375细胞(稳定高表达αvβ3受体)为模型,通过Transwell法检测9株混克隆上清对肿瘤细胞迁移的抑制作用,筛选出抑制效果呈强-中-弱梯度的5株克隆;对这5株克隆进行亚克隆培养,同样采用Transwell法检测亚克隆上清的迁移抑制活性;基于亚克隆测序结果合成嵌合抗体,设置4个浓度梯度(160、80、40、20 μg·mL-1)及阴性对照(无抗体处理组),验证嵌合抗体与上清的活性一致性。结果显示,9株混克隆上清对H-αvβ3-A375细胞迁移的抑制率存在显著差异(P0.05),范围为26.77%~99.89%;筛选出的5株亚克隆上清与对应混克隆上清的抑制效果无统计学差异(P0.05),组间抑制率差异显著(P0.05);嵌合抗体在各浓度梯度下的迁移抑制率与混克隆、亚克隆上清一致(P0.05)。研究建立的“杂交瘤上清-Transwell”组合评估方法,可在混克隆阶段直接实现抗体迁移抑制功能的早期筛选,无需抗体纯化步骤,准确率接近100%,方法显著缩短了抗体研发周期,降低了早期研发成本,为抗转移抗体的高效开发提供了可靠的技术手段。
研究系统探讨了核因子IA(nuclear factor IA, NFIA)在HER2阳性乳腺癌脑转移(breast cancer brain metastasis,BCBM)中的表达特征以及与患者预后的关系,及其在肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)中的潜在作用,旨在为临床干预提供新的治疗靶点。基于多个公共数据库分析了NFIA的表达特点及其与预后的相关性,并结合临床配对样本开展免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)验证。同时,整合公共数据库与自测单细胞转录组数据,对NFIA高表达细胞亚群的功能状态及其微环境通讯特征进行了系统分析。结果显示,NFIA在人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2, HER2)阳性BCBM中显著高表达,且其高表达与患者不良预后密切相关。单细胞分析进一步揭示,NFIA高表达的肿瘤上皮细胞表现出显著的基因组不稳定性和高度恶性特征,并伴随侵袭、增殖等肿瘤相关通路的显著激活。此外,NFIA高表达细胞通过调控上皮间质转化等关键信号通路,在肿瘤微环境中发挥重要作用。综上所述,NFIA高表达定义了HER2阳性BCBM中具有高度恶性特征的肿瘤上皮细胞亚群,并通过微环境调控促进肿瘤进展,为HER2阳性乳腺癌脑转移的精准治疗提供了潜在的分子靶点。
基于网络药理学与细胞实验探讨了汉黄芩素(wogonin, WOG)对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury, CIRI)的神经保护作用及其分子机制。通过SwissTargetPrediction预测WOG的作用靶点,结合GeneCards数据库获取CIRI相关基因,筛选共同靶点并进行GO、KEGG富集分析和蛋白互作网络构建。采用分子对接评估WOG与关键靶点的结合能力。细胞实验采用PC12细胞,设立对照组、氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)组、OGD+WOG组,克隆形成实验检测细胞增殖能力,FerroOrange荧光探针检测Fe2+水平,C11 BODIPY 581/591荧光探针检测脂质过氧化物含量,免疫荧光检测谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)含量,GSH/GSSG试剂盒检测谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,Western blotting检测花生四烯酸15-脂氧合酶(arachidonate 15-lipoxygenase,ALOX15)蛋白表达水平。结果共获得51个WOG-CIRI共同靶点。GO与KEGG分析显示,靶点显著富集于花生四烯酸代谢通路。分子对接表明,WOG与ALOX15结合良好(结合能-8.6 kcal·mol-1)。细胞实验证实,WOG可显著改善OGD诱导的克隆形成抑制,降低Fe2+积累与脂质过氧化水平,提高GSH含量,同时上调GPX4和SLC7A11表达,下调ALOX15表达。综上,WOG可能通过靶向ALOX15,抑制OGD诱导的PC12细胞铁死亡,进而减轻CIRI。