转基因玉米KJ1003转化体PCR检测方法的建立

doi:10.19586/j.2095-2341.2025.0179

生物技术进展 ›› 2026, Vol. 16 ›› Issue (4): 843-852.DOI: 10.19586/j.2095-2341.2025.0179

转基因玉米KJ1003转化体PCR检测方法的建立

高芳瑞¹(), 陈子言¹, 赵桐桐¹, 蒋红叶¹, 张华¹, 廖一尘¹, 江晓丹¹, 傅芳奇¹, 李亚辉¹^,², 王颢潜¹(), 陈红¹()

^1.农业农村部科技发展中心，北京 100176
^2.江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所，南京 210014

收稿日期:2025-12-15 接受日期:2026-01-26 出版日期:2026-07-25 发布日期:2026-09-11
通信作者: 王颢潜,陈红
作者简介:高芳瑞 E-mail: 826796354@qq.com
基金资助:
农业生物育种重大专项(2022ZD040201101)

PCR Detection Method for Transgenic Maize KJ1003

Fangrui GAO¹(), Ziyan CHEN¹, Tongtong ZHAO¹, Hongye JIANG¹, Hua ZHANG¹, Yichen LIAO¹, Xiaodan JIANG¹, Fangqi FU¹, Yahui LI¹^,², Haoqian WANG¹(), Hong CHEN¹()

^1.Development Center of Science and Technology，Ministry of Agriculture and Rural Affairs，Beijing 100176，China
^2.Institute of Food Safety and Nutriton，Jiangsu Academy of Agricultural Sciences，Nanjing 210014，China

Received:2025-12-15 Accepted:2026-01-26 Online:2026-07-25 Published:2026-09-11
Contact: Haoqian WANG,Hong CHEN

摘要/Abstract

摘要：

转基因玉米KJ1003是科稷达隆（北京）生物技术有限公司研发的玉米转化体，具有良好的抗虫耐除草剂性能，已获得转基因生物安全证书，产业化前景良好。以KJ1003转化体特异性序列为靶标，通过引物设计、筛选，特异性测试、灵敏度测试、检出限测试、稳健性测试和实验室间验证等，建立了KJ1003转化体特异性普通PCR定性检测方法。结果表明，该方法可扩增获得165 bp特异性片段，检测灵敏度达0.05%，检出限达0.1%，稳健性良好，8家实验室特异性、检出限、重复性和再现性验证结果均达到国家标准要求。构建的方法可为我国转基因作物的检测和安全监管提供科学依据和技术支撑。

关键词: 转基因玉米, KJ1003转化体, 抗虫耐除草剂, 转化体特异性, 普通PCR, 定性检测

Abstract:

The genetically modified maize KJ1003 is a strain developed by Kejidalong （Beijing） Biotechnology Co.， Ltd. It shows insect resistance and herbicide tolerance has obtained a genetically modified organism safety certificate and has a good industrialization prospect. This study established a qualitative PCR detection method for maize KJ1003， through primer design， primer screening， specificity test， sensitivity test， detection limit test， stability test， and laboratory validation， with the specific sequence of KJ1003 as the target. Results showed that a 165 bp specific fragment could be amplified， with a detection sensitivity of 0.05% and a limit of detection of 0.1%， and had a good stability. Verification results of specificity， detection limit， repeatability and reproducibility for this method from 8 laboratories all met the national standard requirements. This study provides a scientific basis and technical support for the detection and safety supervision of genetically modified crops in China.

Key words: genetically modified maize, event KJ1003, anti-insect and herbicide-tolerant, event-specific, gel-based PCR, qualitative detection

中图分类号:

高芳瑞, 陈子言, 赵桐桐, 蒋红叶, 张华, 廖一尘, 江晓丹, 傅芳奇, 李亚辉, 王颢潜, 陈红. 转基因玉米KJ1003转化体PCR检测方法的建立[J]. 生物技术进展, 2026, 16(4): 843-852.

Fangrui GAO, Ziyan CHEN, Tongtong ZHAO, Hongye JIANG, Hua ZHANG, Yichen LIAO, Xiaodan JIANG, Fangqi FU, Yahui LI, Haoqian WANG, Hong CHEN. PCR Detection Method for Transgenic Maize KJ1003[J]. Current Biotechnology, 2026, 16(4): 843-852.

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图/表 8

参考文献 27

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转基因混合样品	组成成分(每种转化体质量分数1%)
其他转基因玉米混合样	Bt11、Bt176、MON810、MON863、GA21、NK603、T25、TC1507、MON89034、MON88017、59122、MIR604、3272、MON87460、DAS40278-9、4114、MON87427、5307、DBN9858、ND207、DBN9501、瑞丰125、DBN9936、MON87411、MZIR098、瑞丰8、BFL4-2、nCX-1
转基因大豆混合样	GTS40-3-2、MON89788、A5547-127、A2704-12、356043、305423、CV127、MON87701、MON87708、MON87769、MON87705、FG72、DAS81419-2、DAS-444Ø6-6、MON87751、SHZD3201、CAL16、中黄6106、DBN9004
转基因水稻混合样	TT51-1、KF-6、KMD-1、M12、KF-8、KF-2、G6H1、T1C-19
转基因油菜混合样	MS1、MS8、RF1、RF2、RF3、T45、Oxy-235、Topas19/2、MON88302、73496
转基因棉花混合样	MON1445、MON531、MON15985、LLCOTTON25、MON88913、GHB614、COT102
非转基因玉米混合样	多种非转基因玉米等量混合制成

转基因混合样品	组成成分(每种转化体质量分数1%)
其他转基因玉米混合样	Bt11、Bt176、MON810、MON863、GA21、NK603、T25、TC1507、MON89034、MON88017、59122、MIR604、3272、MON87460、DAS40278-9、4114、MON87427、5307、DBN9858、ND207、DBN9501、瑞丰125、DBN9936、MON87411、MZIR098、瑞丰8、BFL4-2、nCX-1
转基因大豆混合样	GTS40-3-2、MON89788、A5547-127、A2704-12、356043、305423、CV127、MON87701、MON87708、MON87769、MON87705、FG72、DAS81419-2、DAS-444Ø6-6、MON87751、SHZD3201、CAL16、中黄6106、DBN9004
转基因水稻混合样	TT51-1、KF-6、KMD-1、M12、KF-8、KF-2、G6H1、T1C-19
转基因油菜混合样	MS1、MS8、RF1、RF2、RF3、T45、Oxy-235、Topas19/2、MON88302、73496
转基因棉花混合样	MON1445、MON531、MON15985、LLCOTTON25、MON88913、GHB614、COT102
非转基因玉米混合样	多种非转基因玉米等量混合制成

编号	引物名称及序列（5'→3'）		产物大小/bp	来源
组合1	LB-F1： 5'-CGCGTGAATACGTAGCTGTG-3'	LB-R1： 5'-GAGCGCGTAAGTCTTGGTCT-3'	229	本研究设计
组合2	LB-F2： 5'-GAGCCACACCCAAGTTCCTAA-3'	LB-R2： 5'-TGGCAAATGGGGGATGCTTT-3'	235	本研究设计
组合3	LB-F3： 5'-TGTGTCCCAAGTAAACCTCAGT-3'	LB-R3： 5'-CCAAGATGGAGGGAAGGAGC-3'	253	本研究设计
组合4	LB-F4： 5'-GTAACAGAAAACACCACGGTCC-3'	LB-R4： 5'-ATGAGGGCGACCAGACCTTA-3'	165	本研究设计
组合5	LB-F1： 5'-CGCGTGAATACGTAGCTGTG-3'	LB-R4： 5'-GTAACAGAAAACACCACGGTCC-3'	302	本研究设计
组合6	LB-F2： 5'-GAGCCACACCCAAGTTCCTAA-3'	LB-R1： 5'-GAGCGCGTAAGTCTTGGTCT-3'	131	本研究设计
组合7	LB-F3： 5'-TGTGTCCCAAGTAAACCTCAGT-3'	LB-R2： 5'-TGGCAAATGGGGGATGCTTT-3'	306	本研究设计
组合8	LB-F4： 5'-GTAACAGAAAACACCACGGTCC-3'	LB-R1： 5'-GAGCGCGTAAGTCTTGGTCT-3'	92	本研究设计
组合9	RB-F1： 5'-TTTCTCTTCCCCAACCGTGC-3'	RB-R1： 5'-AGCGCGCAAACTAGGATAAA-3'	143	本研究设计
组合10	RB-F2： 5'-GTGTTCCAGCTGACCGTGT-3'	RB-R2： 5'-CGCGGTGTCATCTATGTTACT-3'	145	本研究设计
组合11	RB-F3： 5'-CGCAGTGCGTTTGAGGC-3'	RB-R1： 5'-AGCGCGCAAACTAGGATAAA-3'	265	本研究设计
组合12	RB-F4： 5'-CATGGCCCTGACCGTAGC-3'	RB-R4： 5'-AAATATAGCGCGCAAACTAGGAT-3'	232	本研究设计
组合13	RB-F2： 5'-GTGTTCCAGCTGACCGTGT-3'	RB-R1： 5'-AGCGCGCAAACTAGGATAAA-3'	173	本研究设计
组合14	RB-F3： 5'-CGCAGTGCGTTTGAGGC-3'	RB-R4： 5'-AAATATAGCGCGCAAACTAGGAT-3'	271	本研究设计
组合15	RB-F4： 5'-CATGGCCCTGACCGTAGC-3'	RB-R2： 5'-CGCGGTGTCATCTATGTTACT-3'	198	本研究设计
组合16	LB-F1： 5'-TCCTCGCTCCCTTTTCTCTT-3'	LB-R1： 5'-TTAGAGTCCCGCAATTATACATT-3'	202	公司提供

编号	引物名称及序列（5'→3'）		产物大小/bp	来源
组合1	LB-F1： 5'-CGCGTGAATACGTAGCTGTG-3'	LB-R1： 5'-GAGCGCGTAAGTCTTGGTCT-3'	229	本研究设计
组合2	LB-F2： 5'-GAGCCACACCCAAGTTCCTAA-3'	LB-R2： 5'-TGGCAAATGGGGGATGCTTT-3'	235	本研究设计
组合3	LB-F3： 5'-TGTGTCCCAAGTAAACCTCAGT-3'	LB-R3： 5'-CCAAGATGGAGGGAAGGAGC-3'	253	本研究设计
组合4	LB-F4： 5'-GTAACAGAAAACACCACGGTCC-3'	LB-R4： 5'-ATGAGGGCGACCAGACCTTA-3'	165	本研究设计
组合5	LB-F1： 5'-CGCGTGAATACGTAGCTGTG-3'	LB-R4： 5'-GTAACAGAAAACACCACGGTCC-3'	302	本研究设计
组合6	LB-F2： 5'-GAGCCACACCCAAGTTCCTAA-3'	LB-R1： 5'-GAGCGCGTAAGTCTTGGTCT-3'	131	本研究设计
组合7	LB-F3： 5'-TGTGTCCCAAGTAAACCTCAGT-3'	LB-R2： 5'-TGGCAAATGGGGGATGCTTT-3'	306	本研究设计
组合8	LB-F4： 5'-GTAACAGAAAACACCACGGTCC-3'	LB-R1： 5'-GAGCGCGTAAGTCTTGGTCT-3'	92	本研究设计
组合9	RB-F1： 5'-TTTCTCTTCCCCAACCGTGC-3'	RB-R1： 5'-AGCGCGCAAACTAGGATAAA-3'	143	本研究设计
组合10	RB-F2： 5'-GTGTTCCAGCTGACCGTGT-3'	RB-R2： 5'-CGCGGTGTCATCTATGTTACT-3'	145	本研究设计
组合11	RB-F3： 5'-CGCAGTGCGTTTGAGGC-3'	RB-R1： 5'-AGCGCGCAAACTAGGATAAA-3'	265	本研究设计
组合12	RB-F4： 5'-CATGGCCCTGACCGTAGC-3'	RB-R4： 5'-AAATATAGCGCGCAAACTAGGAT-3'	232	本研究设计
组合13	RB-F2： 5'-GTGTTCCAGCTGACCGTGT-3'	RB-R1： 5'-AGCGCGCAAACTAGGATAAA-3'	173	本研究设计
组合14	RB-F3： 5'-CGCAGTGCGTTTGAGGC-3'	RB-R4： 5'-AAATATAGCGCGCAAACTAGGAT-3'	271	本研究设计
组合15	RB-F4： 5'-CATGGCCCTGACCGTAGC-3'	RB-R2： 5'-CGCGGTGTCATCTATGTTACT-3'	198	本研究设计
组合16	LB-F1： 5'-TCCTCGCTCCCTTTTCTCTT-3'	LB-R1： 5'-TTAGAGTCCCGCAATTATACATT-3'	202	公司提供

样品名称	8家实验室验证
样品名称	Lab1	Lab2	Lab3	Lab4	Lab5	Lab6	Lab7	Lab8
空白对照	-	-	-	-	-	-	-	-
阴性对照	-	-	-	-	-	-	-	-
阳性对照	+	+	+	+	+	+	+	+
1% KJ1003	+	+	+	+	+	+	+	+
其他转基因玉米混合样	-	-	-	-	-	-	-	-
转基因大豆混合样	-	-	-	-	-	-	-	-
转基因水稻混合样	-	-	-	-	-	-	-	-
转基因油菜混合样	-	-	-	-	-	-	-	-
转基因棉花混合样	-	-	-	-	-	-	-	-
非转基因玉米混合样	-	-	-	-	-	-	-	-
0.1% KJ1003（检出限）	+	+	+	+	+	+	+	+

转基因玉米KJ1003转化体PCR检测方法的建立

PCR Detection Method for Transgenic Maize KJ1003

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