CRISPR/Cas9基因编辑高油酸大豆快速检测方法研究

doi:10.19586/j.2095-2341.2025.0077

生物技术进展 ›› 2026, Vol. 16 ›› Issue (4): 878-884.DOI: 10.19586/j.2095-2341.2025.0077

CRISPR/Cas9基因编辑高油酸大豆快速检测方法研究

袁小雅¹(), 甄珍²()

^1.长沙海关技术中心，长沙 410000
^2.哈尔滨海关技术中心，哈尔滨 150000

收稿日期:2025-07-04 接受日期:2025-10-28 出版日期:2026-07-25 发布日期:2026-09-11
通信作者: 甄珍
作者简介:袁小雅 E-mail: libbyyxy@qq.com；
基金资助:
海关总署科研项目(2022HK031)

Study on Rapid Detection Method for CRISPR/Cas9-mediated Gene-edited High-oleic Soybean

Xiaoya YUAN¹(), Zhen ZHEN²()

^1.Changsha Customs Technology Center，Changsha 410000，China
^2.Harbin Customs Technology Center，Harbin 150000，China

Received:2025-07-04 Accepted:2025-10-28 Online:2026-07-25 Published:2026-09-11
Contact: Zhen ZHEN

摘要/Abstract

摘要：

基因编辑作为一种重要且新兴的前沿生物技术，在生命科学研究、物种改良与人类健康等领域得到广泛应用，目前已有十余种动植物被批准商业化。基因编辑植物的检测技术是管控生物安全、规范种业市场的核心支撑，而由于监管要求不同，检测方法及规范完备的监测体系至关重要。基于此，针对成簇的规律间隔的短回文重复序列/CRISPR相关蛋白9（clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9，CRISPR/Cas9）基因编辑的高油酸大豆，通过对比其与野生型大豆基因序列，设计多组特异性引物探针序列，利用荧光PCR法筛选出1组符合要求的引物探针序列，检测灵敏度可达0.01%，稳定性良好，且在数字PCR检测体系中同样具有特异性。检测方法的建立不仅为生物安全监管提供了技术支撑，也为相关检测标准的制定奠定了基础。

关键词: 大豆, 基因编辑, 油酸, 荧光PCR, 数字PCR

Abstract:

Gene editing， as an important and emerging cutting-edge biotechnology， has been widely applied in fields， such as life science research， species improvement， and human health. Currently， more than ten species of animals and plants have been approved for commercialization. The detection technology of gene-edited plants is the core support for controlling biosafety and regulating the seed industry market. Due to different regulatory requirements， detection methods and a standardized and complete monitoring system are crucial. Based on this， for clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9 （CRISPR/Cas9）-mediated gene-edited high-oleic soybean， multiple sets of specific primer probe sequences were designed by comparing their gene sequences with wild-type soybean. A set of primer probe sequences that met the requirements was screened using fluorescence PCR method， with a detection sensitivity of up to 0.01%， good stability， and specificity in the digital PCR detection system. The establishment of detection methods not only provides technical support for biosafety supervision， but also lays the foundation for the formulation of relevant detection standards.

Key words: soybean, gene editing, oleic, fluorescent PCR, digital PCR

中图分类号:

Q943.2

袁小雅, 甄珍. CRISPR/Cas9基因编辑高油酸大豆快速检测方法研究[J]. 生物技术进展, 2026, 16(4): 878-884.

Xiaoya YUAN, Zhen ZHEN. Study on Rapid Detection Method for CRISPR/Cas9-mediated Gene-edited High-oleic Soybean[J]. Current Biotechnology, 2026, 16(4): 878-884.

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链接本文: https://swjsjz.magtechjournal.com/CN/10.19586/j.2095-2341.2025.0077

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图/表 11

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国家	品种名称
中国	‘黑河’
中国	‘齐黄34’
中国	‘黑农84’
中国	‘绥农52’
中国	‘东农豆358’
日本	‘日本千斤黄大豆’
德国	‘德豆99-16’
俄罗斯	‘斯拉夫1号’
俄罗斯	‘索非亚’
韩国	‘韩引1号’
韩国	‘太白’
美国	‘迪卡布24-29’
美国	‘先锋93B27’

国家	品种名称
中国	‘黑河’
中国	‘齐黄34’
中国	‘黑农84’
中国	‘绥农52’
中国	‘东农豆358’
日本	‘日本千斤黄大豆’
德国	‘德豆99-16’
俄罗斯	‘斯拉夫1号’
俄罗斯	‘索非亚’
韩国	‘韩引1号’
韩国	‘太白’
美国	‘迪卡布24-29’
美国	‘先锋93B27’

组别	名称	序列(5→3')	产物大小/bp
G1	G1-F G1-R G1-P	5'-ACCTACTTCCACCTCCTTCC-3'	105
		5'-CACACTCGTGAGCAATCACC-3'
		5'-CATGGCCAATCTTATTGGGTTCTCCA-3' *
G2	G2-F G2-R G2-P	5'-CTTCCACCTCCTTCCTCAAC-3'	99
		5'-TCGTGAGCAATCACCCACA-3'
		5'-TGCATGGCCAATCTTATTGGGTTCT-3' *
G3	G3-F G3-R G3-P	5'-TTCCACCTCCTCCCTCACC-3'	102
		5'-GTACTTGCTGAAGGCATGGT-3'
		5'-TCATTGCATGGCTTGGGTTCTCCAA-3'*
G4	G4-F G4-R G4-P	5'-TACTTCCACCTCCTCCCTCAC-3'	96
		5'-ATGGGTACTTGCTGAAGGCA-3'
		5'-ATTGCATGGCTTGGGTTCTCC-3' *

组别	名称	序列(5→3')	产物大小/bp
G1	G1-F G1-R G1-P	5'-ACCTACTTCCACCTCCTTCC-3'	105
		5'-CACACTCGTGAGCAATCACC-3'
		5'-CATGGCCAATCTTATTGGGTTCTCCA-3' *
G2	G2-F G2-R G2-P	5'-CTTCCACCTCCTTCCTCAAC-3'	99
		5'-TCGTGAGCAATCACCCACA-3'
		5'-TGCATGGCCAATCTTATTGGGTTCT-3' *
G3	G3-F G3-R G3-P	5'-TTCCACCTCCTCCCTCACC-3'	102
		5'-GTACTTGCTGAAGGCATGGT-3'
		5'-TCATTGCATGGCTTGGGTTCTCCAA-3'*
G4	G4-F G4-R G4-P	5'-TACTTCCACCTCCTCCCTCAC-3'	96
		5'-ATGGGTACTTGCTGAAGGCA-3'
		5'-ATTGCATGGCTTGGGTTCTCC-3' *

百分比浓度/%	C_t 值			平均C_t 值	RSD/%
百分比浓度/%	1	2	3	平均C_t 值	RSD/%
5.0	34.79	34.14	33.22	34.05	2.32
1.0	35.01	34.61	34.66	34.76	0.63
0.50	34.25	35.70	35.15	35.04	2.09
0.10	35.72	36.15	35.40	35.76	1.05
0.05	35.90	36.52	36.19	36.20	0.86
0.01	37.81	37.89	38.36	38.02	0.78
0.005	39.18	ND	ND	ND	ND

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Study on Rapid Detection Method for CRISPR/Cas9-mediated Gene-edited High-oleic Soybean

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1.0	0.97	1.8	-3.0	97.0
5.0	5.15	1.2	3.0	103.0
10.0	9.88	0.9	-1.2	98.8

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